外泌体 lncRNA 测序
外泌体LncRNA测序(Exosome LncRNA Sequencing, ELRS)是针对外泌体中长链非编码RNA(Long non-coding RNA, LncRNA,长度>200nt、无蛋白编码潜能的RNA分子)开展的专项高通量测序技术。外泌体作为细胞间通讯的核心载体,其携带的LncRNA经囊泡膜保护,可规避体液中RNA酶的降解,在血清、尿液等体液中稳定性极强,且能精准反映源细胞的生理病理状态。外泌体LncRNA虽不直接编码蛋白质,但通过调控靶基因转录、吸附miRNA(ceRNA机制)、参与染色质修饰等方式,在疾病发生发展中发挥关键作用。与外泌体全转录组测序相比,ELRS聚焦LncRNA专项分析,无需兼顾mRNA、miRNA等其他RNA类型,可将测序资源集中于目标分子,实现更高的测序深度(≥10G)和更精准的低丰度LncRNA检出;与组织/细胞LncRNA测序相比,ELRS依托无创体液样本,更适合临床动态监测与大样本队列研究。目前,ELRS已成为疾病早期诊断标志物筛选、外泌体介导的细胞通讯机制研究、临床疗效与预后评估的核心技术,尤其适用于肿瘤、神经退行性疾病、心血管疾病等无法便捷获取组织样本的研究场景。

原理介绍
外泌体LncRNA测序的核心原理是外泌体纯化→LncRNA富集→专项测序→功能解析,具体为:外泌体分离与纯度验证,从体液或细胞培养上清中分离外泌体,结合0.22μm滤膜过滤去除细胞碎片与游离RNA;通过NTA、Western blot、透射电镜三重验证外泌体纯度;外泌体RNA提取与富集;LncRNA专项文库构建,将富集后的LncRNA随机打断为200-300bp片段,通过链特异性逆转录合成cDNA,连接测序接头与索引序列,构建标准化测序文库;高通量测序,采用Illumina NovaSeq/MiSeq二代测序平台,测序深度≥10G clean data,保障低丰度LncRNA的有效覆盖;数据处理与功能解析,构建LncRNA-miRNA-mRNA调控网络;通过GO/KEGG通路富集分析,挖掘差异LncRNA的核心生物学功能。
文献案例
《Prospective Clinical Research Report》期刊上发表的“Circulating exosomal long non-coding RNA H19 as a potential novel diagnostic and prognostic biomarker for gastric cancer”的研究论文揭示血清外泌体长链非编码RNA H19(circulating exosomal lncRNA H19)在胃癌患者中显著上调,且其水平与肿瘤分期(如TNM分期、淋巴结转移)密切相关;术前H19水平可作为胃癌诊断的新型生物标志物,术后水平下降提示治疗有效,具有重要的诊断和预后价值。ELRS在该研究中发挥了“从差异发现到临床验证”的关键作用,不仅识别出外泌体H19这一胃癌新型生物标志物,还通过其稳定性和临床相关性分析,为其作为诊断和预后工具提供了坚实的技术支撑。该研究为胃癌的早期无创筛查和精准治疗提供了新的思路,也体现了ELRS在液体活检领域的重要应用价值。

送样标准
血清≥5mL;血浆≥5mL;尿液≥10mL;脑脊液≥2mL;唾液≥3mL;
≥20mL;
≥200μL;
总量≥50ng;
交付内容
数据质量控制报告
外泌体纯度鉴定、RNA质量评估、测序质量评估;
LncRNA检测与注释结果
表达量矩阵、差异表达分析、数据库注释;
功能分析结果
GO/KEGG通路富集分析图(Top20富集通路)、LncRNA-miRNA-mRNA调控网络示意图、差异LncRNA共表达网络分析;
分析与解读报告
检测结论,明确核心差异LncRNA集合、潜在生物标志物候选名单、与疾病/表型的关联强度;结果解读,核心LncRNA的调控机制。
常见问题
因为外泌体存在免疫分型,可能是某样本中表达本来就低,导致检测不到,就是WB有些指标是检测不到的;不是某一个项目的问题,而是由于外泌体本身的特性。没有什么普适的, 尤其是细胞上清没有规律,血浆率低的话,可能WB极限就检测不到了。一般推荐2-3个阳性,1个阴性。阳性率低的原因是跟样本本身有关。
适合。外泌体RNA总量通常为ng级,通过以下方案保障可靠性:①选用高灵敏度RNA提取试剂盒,RNA回收率≥80%;②采用低起始量LncRNA富集与文库构建试剂盒(最低起始量10ng总RNA);③提高测序深度至12-15G clean data,增强低丰度LncRNA覆盖;④数据分析时采用严格的过滤标准,降低假阳性。 外泌體 miRNA 測序
