蛋白表达与检测
提供从高灵敏度检测到空间定位分析的全套方案，精准量化目标蛋白的表达水平。
EMSA
凝胶迁移实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA），也叫电泳迁移率变动分析或凝胶移位试验，是一种经典的体外检测蛋白质与核酸（DNA/RNA）相互作用的分子生物学技术。该技术弥补了体内互作验证技术（如 ChIP）无法直接体现分子结合能力的缺陷，可精准鉴定 DNA 结合蛋白、测定蛋白与核酸相互作用的特异性及亲和力，还能研究基因突变对互作的影响、精确定位蛋白在核酸序列上的结合位点。相较于 ChIP-seq 等技术，EMSA 操作简便、成本较低、结果直观，是验证转录因子与靶基因启动子直接结合的 “金标准”，广泛应用于植物发育调控、动物疾病机制、基因表达调控网络解析等研究领域。
原理介绍
EMSA的核心原理是蛋白质与带标记的核酸（DNA或RNA）探针结合后，会形成分子量更大、结构更复杂的复合物，从而导致在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移速率滞后于自由的核酸探针。蛋白（P）与特异性核酸位点（D）可形成动态平衡的蛋白 - 核酸复合物（PD），即 P+D⇌PD，当结合速率（Ka）大于解离速率（Kd）时，体系中会稳定存在 PD 复合物；对孵育后的样品进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，游离的标记核酸探针因分子量小、电荷均匀，在电场中迁移速度快；而蛋白 - 核酸复合物因分子量增大、空间构象改变，迁移速度大幅减慢，会在凝胶上形成滞后于游离探针的 “偏移条带”；若核酸存在多个蛋白结合位点，可形成不同分子量的复合物，电泳后会呈现多条偏移条带；通过特异性竞争探针、抗体等实验，还可进一步验证互作的特异性及复合物中蛋白的身份。
文献案例
《Plant Physiology》发表题为 “Transcription factor CrWRKY42 coregulates chlorophyll degradation and carotenoid biosynthesis in citrus” 的研究论文，该研究借助 EMSA 技术阐明了柑橘果实转色的分子调控机制。研究人员从柑橘果实颜色突变体中鉴定出关键转录因子 CrWRKY42，推测其可调控叶绿素降解和类胡萝卜素合成通路基因。为验证直接互作关系，研究人员针对类胡萝卜素合成基因 CrBCH1、CrLCYB2 和叶绿素降解基因 CrNYC、CrSGR 的启动子 W-box 序列设计生物素标记探针，与纯化的 CrWRKY42-MBP 重组蛋白进行 EMSA 实验。结果显示，实验组均出现明显的条带偏移；而加入过量未标记同源探针后，偏移条带显著减弱，加入突变 W-box 序列的探针则无偏移现象。同时，超迁移实验中加入 CrWRKY42 抗体后，出现了迁移更慢的超迁移条带，证实了结合的特异性。结合 Y1H、双荧光素酶实验，最终证实 CrWRKY42 可同时结合多个通路基因启动子，协同调控柑橘果实叶绿素降解和类胡萝卜素积累，推动果实由绿转黄。
送样标准
浓度≥0.5mg/mL，体积≥200μL，纯度＞80%，-80℃保存，干冰运输，避免反复冻融
新鲜叶片 / 果实＞1g，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需明确组织部位及处理条件
动物组织＞0.5g、细胞沉淀＞1×10^7 个，液氮速冻 - 80℃保存，干冰运输；需提供组织 / 细胞来源信息
干粉或溶液形式，溶液浓度≥10μM，体积≥50μL，-20℃避光保存，冰袋运输；需附带探针序列及标记类型
交付内容
EMSA 原始实验数据
包括凝胶电泳原始图谱、转膜显影图片、各对照组条带灰度值定量数据；
特异性验证结果报告
涵盖特异性竞争、非特异性竞争、超迁移实验的完整结果，标注条带偏移情况及互作特异性判定；
技术支持文档
提供探针序列优化建议、蛋白-核酸结合条件参数表、实验问题排查指南，便于后续实验重复与优化。
常见问题
非特异性条带多由蛋白与探针的非特异性结合导致，可通过以下方式改善：①在结合体系中增加 Poly (dI-dC) 用量，增强非特异性结合抑制效果；②提高结合缓冲液中的盐浓度（如 NaCl 浓度调至 100-200mM），降低非特异性互作；③降低蛋白样品用量，减少过量蛋白引发的非特异性结合；④优化探针设计，缩短探针长度并聚焦核心结合位点，减少非特异性结合区域。
①选用浓度适中的凝胶（4%-6%），避免浓度过低导致凝胶脆性过大；②转膜前将凝胶浸泡在转膜缓冲液中 10-15min，使其充分溶胀后再缓慢转移至滤纸上，避免直接暴力操作；③转膜过程中保持装置平稳，控制转膜电流和时间，防止凝胶因过热变形断裂。
①抗体用量不足或抗体亲和力低，需增加抗体浓度或更换特异性更高的抗体；②抗体无法识别天然构象的蛋白（如重组蛋白标签影响抗体结合），可更换针对蛋白不同表位的抗体；③孵育时间不足，需延长抗体与复合物的孵育时间（如室温孵育 1-2h）；④蛋白 - 核酸复合物结合力弱，抗体加入后破坏了原有复合物，可先优化蛋白 - 核酸结合条件再进行超迁移实验。
