蛋白表达与检测
提供从高灵敏度检测到空间定位分析的全套方案，精准量化目标蛋白的表达水平。
Elisa
酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是一种基于抗原 - 抗体特异性结合原理，结合酶促显色反应实现目标物质定性与定量检测的免疫分析技术。该技术于 1971 年由 Engvall 和 Perlmann 等学者正式确立，其前身为 1960 年代的放射免疫测定（RIA）和酶免疫测定（EIA），经过半个多世纪的优化，已成为生物医学领域的核心检测手段。ELISA 克服了传统免疫检测方法灵敏度低、操作复杂、无法批量检测的缺陷，兼具高特异性、高灵敏度、操作简便、成本可控、结果稳定且易于自动化的特点，可实现对蛋白质、激素、病原体抗原 / 抗体等可溶性物质的精准定量。目前其应用范围已覆盖医学诊断（传染病检测、肿瘤标志物筛查、自身免疫病诊断）、食品安全（致病菌、毒素残留检测）、生命科学研究（细胞因子、蛋白表达量检测）等多个领域，既适用于临床小样本精准检测，也可满足血清流行病学调查等大批量样本筛查需求。
原理介绍
的核心原理是将抗原或抗体固定于固相载体（如聚苯乙烯酶标板），通过抗原 - 抗体特异性结合形成免疫复合物，再利用酶标记抗体的催化活性，将无色底物转化为有色产物，最终通过产物吸光度值（OD 值）实现目标物质的定量，主要分为以下 4 个核心步骤：固相化抗原 / 抗体：将捕获用抗原或抗体包被在酶标板孔内，使其牢固结合于固相载体表面，为后续免疫反应提供靶点；封闭非特异性位点：使用脱脂奶粉、BSA 等封闭液覆盖酶标板未结合位点，避免后续抗体非特异性吸附，降低背景信号；抗原 - 抗体特异性反应：加入待测样本和酶标记抗体，样本中的目标抗原 / 抗体与固相捕获分子结合，同时酶标记抗体与免疫复合物特异性结合，形成 “固相载体 - 捕获分子 - 目标物 - 酶标抗体” 的复合物；显色与检测：加入酶特异性底物（如 HRP 适配的 TMB），酶催化底物发生显色反应，颜色深浅与目标物浓度正相关，加入终止液停止反应后，通过酶标仪检测 OD 值即可实现定量。
文献案例
《Microbiology Spectrum》的一项题为“Remapping the spatial distribution of neutralizing sites and their immunodominance on the capsid of different topotypes of FMDV serotype O by site-directed competitive ELISA for detection of neutralizing antibodies”的研究，展示了ELISA技术在解析复杂病毒抗原表位与评估疫苗免疫应答中的应用。该研究针对O型口蹄疫病毒（FMDV）抗原表位不明确的问题，首先利用27个中和抗体进行配对竞争性ELISA，将其衣壳表面中和位点重新划分为6个不同区域，发现了两个新型位点。随后，研究人员从接种了四种不同谱系疫苗的牛、羊、猪体内采集血清，采用位点定向竞争ELISA定量分析了血清中针对各特定位点的抗体丰度。核心发现揭示，不同毒株谱系在不同宿主体内诱导的免疫优势位点存在显著差异；尤为重要的是，针对位点6的中和抗体滴度与传统的病毒中和试验结果呈现出极强的相关性（相关系数高达0.8693）。这项研究不仅系统性绘制了O型FMDV的中和位点图谱，更通过ELISA技术锁定了与中和活性高度相关的关键靶标，为开发高通量的中和抗体替代检测方法提供了直接的实验依据。
送样标准
＞200μL / 份，无溶血、无脂血，-20℃保存，干冰运输，避免反复冻融
＞500μL / 份，4℃离心去除细胞碎片后 - 20℃保存，干冰运输
＞0.5g / 份，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需提供匀浆缓冲液配方
浓度≥1mg/mL，体积≥500μL，纯度＞85%，-80℃保存，干冰运输；需附带蛋白活性验证报告
冻干品或溶液（浓度≥10μg/mL），-20℃避光保存，冰袋运输；需提供标准品浓度及来源信息
交付内容
原始检测数据
酶标仪原始 OD 值记录表、各对照组与样本孔显色图片、标准曲线拟合图谱及拟合方程；
定量分析报告
样本中目标抗原 / 抗体浓度计算结果，含标准差、CV 值及阳性 / 阴性判定结论，同时提供与标准品的浓度对比表；
完整实验报告
涵盖实验原理、仪器与试剂信息、详细操作步骤（包被浓度、孵育条件、试剂稀释比例等）、实验质控记录、结果分析与讨论；
技术支持文档
提供实验方法优化建议、试剂储存条件说明、常见问题排查指南，便于后续实验重复与方法改进。
常见问题
①封闭不充分，需更换封闭液类型（如将脱脂奶粉更换为 BSA）或延长封闭时间；②洗板不彻底，增加洗涤次数或延长每孔洗涤液静置时间，同时检查洗板机管路是否堵塞；③酶标抗体浓度过高，需梯度稀释酶标抗体，筛选最佳工作浓度；④底物孵育时间过长，需严格控制显色时间，避免底物非特异性显色。
①样本中目标物浓度低于检测下限，可浓缩样本或降低稀释倍数后重新检测；②孵育时间不足，需延长抗原 - 抗体或酶标抗体的孵育时间（如从 1h 延长至 2h）；③包被抗原 / 抗体活性丧失，需更换新鲜包被液并优化包被条件（如调整包被浓度和孵育温度）；④底物或酶标抗体失活，需使用新鲜底物和酶标记试剂，同时验证试剂效价。
①加样时移液量不均，需校准移液器并规范加样操作，避免孔间体积差异；②酶标板孔间温度不均，孵育时需使用水浴锅而非恒温箱，保证各孔反应条件一致；③试剂未充分混匀，加样前需将标准品、抗体等试剂涡旋混匀；④孔内存在气泡，读数前需轻拍酶标板排出气泡，确保光路通畅。
