蛋白表达与检测
提供从高灵敏度检测到空间定位分析的全套方案，精准量化目标蛋白的表达水平。
Dual-LUC
双荧光素酶报告基因实验（Dual-Luciferase Reporter Assay, Dual-LUC）是基于荧光素酶催化底物发光原理，用于研究基因表达调控（如启动子活性、转录因子结合、信号通路调控）的分子生物学技术。该技术通过同时引入两种荧光素酶（报告荧光素酶与内参荧光素酶），克服了传统单荧光素酶实验中样本差异、转染效率不均等干扰因素，实现对靶基因表达的精准定量。其核心优势在于特异性强、灵敏度高、结果重复性好，可动态反映基因调控的实时变化，广泛应用于启动子活性分析、转录因子 - DNA 结合验证、miRNA 靶向调控验证、信号通路活性检测等领域。相较于凝胶迁移实验（EMSA）、酵母单杂（Y1H）等技术，Dual-LUC 能在活细胞内模拟生理条件下的基因调控过程，更贴近生物体内真实情况，是基因调控机制研究中不可或缺的核心工具。
原理介绍
双荧光素酶实验的核心是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase, FLuc）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase, RLuc）两种不同来源的荧光素酶。通过同时检测两种不同的荧光素酶的活性，以便对基因表达、转录调控或信号通路进行更为详细和准确的分析。关键步骤：构建重组载体：将靶基因启动子片段或调控序列克隆至报告荧光素酶载体（如萤火虫荧光素酶载体 pGL4.10），形成 “启动子 - 报告酶” 融合载体；内参荧光素酶载体（如海肾荧光素酶载体 pRL-TK）作为对照，其表达不受靶基因调控；共转染细胞：将报告载体与内参载体按一定比例共转染至目标细胞，同时设置空白对照（仅转染空载体）和阴性对照（转染突变型启动子载体）；荧光信号检测：转染后培养一段时间，裂解细胞并加入两种荧光素酶的特异性底物，萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）催化 D - 荧光素产生黄绿光（波长～560nm），海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）催化腔肠素产生蓝光（波长～480nm）；结果校准与分析：以海肾荧光素酶的荧光强度（Rluc）为内参，校准萤火虫荧光素酶的荧光强度（Fluc），通过计算 Fluc/Rluc 比值，消除转染效率、细胞活性等差异带来的影响，精准反映靶基因的表达调控水平。
文献案例
《Journal of Neuroinflammation》上题为“Exosomal miR-409-3p secreted from activated mast cells promotes microglial migration, activation and neuroinflammation by targeting Nr4a2 to activate the NF-κB pathway”的研究，利用双荧光素酶报告实验，清晰地证实了外泌体miR-409-3p在神经炎症中的关键作用。前期研究提示，肥大细胞来源的外泌体miR-409-3p可能靶向抑制Nr4a2基因。为验证这一直接调控关系，研究人员首先通过生物信息学预测了Nr4a2基因3‘UTR上的潜在结合位点。随后，他们构建了两种关键的报告质粒：一种是将含有该预测位点的野生型3‘UTR序列插入荧光素酶报告基因下游（WT型）；另一种是对该结合位点进行种子区突变（MUT型）。在实验中，研究人员将这两种报告质粒分别与miR-409-3p模拟物（实验组） 或阴性对照miRNA，以及海肾荧光素酶内参质粒共同转染至细胞。双荧光素酶检测结果清晰显示：与对照组相比，miR-409-3p模拟物能显著抑制WT型报告质粒的荧光素酶活性，但对MUT型报告质粒的活性无影响。这一结果为“Nr4a2是miR-409-3p的直接靶基因”提供了最确凿的证据。
送样标准
浓度≥500ng/μL，体积≥50μL，-20℃保存，冰袋运输；需附带测序报告及载体图谱
细胞系需提供活力＞90% 的冻存细胞，干冰运输；原生质体需新鲜制备，冰袋运输，24h 内送达；需注明细胞类型及培养条件
提供 PCR 扩增后的纯化片段（浓度≥200ng/μL，体积≥30μL）或基因序列（FASTA 格式），-20℃保存，冰袋运输
＞1g / 份，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需明确组织类型（如叶片、愈伤组织）
交付内容
转染与检测原始数据
各实验组与对照组的Fluc 值、Rluc 值、Fluc/Rluc 比值数据表，荧光信号检测原始图谱；
定量分析报告
统计分析结果（如 t-test 或 ANOVA）、差异显著性标注、相对活性柱状图，明确基因调控作用结论；
技术支持文档
提供实验优化建议（如转染条件优化、载体比例调整）、常见问题排查指南，以及后续验证实验（如 EMSA、ChIP）的设计建议。
常见问题
①转录因子或启动子载体构建错误，重新测序验证载体序列，确保启动子片段插入方向正确、转录因子基因编码区完整；②转染载体比例失衡，调整报告载体、内参载体、转录因子载体的比例（通常为 10:1:5），避免内参信号过强或转录因子表达不足；③细胞类型不适合，更换与靶基因天然表达相关的细胞系或原生质体，模拟生理调控环境；④调控作用依赖特定信号诱导，加入对应的信号分子（如激素、胁迫处理）后再进行检测。
①内参载体转染量不足，适当增加 pRL-TK 载体在转染体系中的比例；②内参载体表达效率低，更换启动子更强的内参载体（如 pRL-CMV）；③细胞裂解不充分，内参酶未完全释放，优化裂解条件（如延长裂解时间、增加裂解液体积）；④荧光底物失效，更换新鲜配制的海肾荧光素酶底物，避免底物降解。
①底物配制后未及时使用，荧光素酶底物需现配现用，避免长时间暴露在室温或光照下；②裂解液中存在抑制剂，确保裂解液无 RNase、蛋白酶污染，或在裂解液中加入酶保护剂；③检测操作速度过慢，优化实验流程，确保裂解后 30min 内完成荧光检测；④使用具有信号稳定功能的双荧光素酶检测仪，延长信号采集时间窗口。
