蛋白表达与检测
提供从高灵敏度检测到空间定位分析的全套方案，精准量化目标蛋白的表达水平。
Co-IP
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是基于抗原-抗体特异性结合原理，研究蛋白质间相互作用的经典分子生物学技术。该技术可在非变性条件下捕获细胞内天然状态的 “诱饵蛋白 - 互作蛋白” 复合物，克服了体外蛋白相互作用检测（如体外 Pull-down）无法反映生理状态下互作关系的缺陷，兼具特异性强、结果可信度高、操作相对简便的特点。Co-IP 不仅能验证已知蛋白间的相互作用，还可通过质谱鉴定筛选诱饵蛋白的未知互作搭档，广泛应用于信号通路调控、蛋白复合物组成分析、疾病相关分子机制研究等领域，是解析蛋白质网络调控的核心技术之一。相较于其他互作检测技术，Co-IP 能最大程度保留蛋白天然构象与互作状态，结果更贴近生物体内真实情况，已成为生命科学研究中不可或缺的基础技术。
原理介绍
Co-IP 的核心原理是利用特异性抗体捕获目标蛋白（诱饵蛋白），并通过蛋白间的生理相互作用，同步捕获与诱饵蛋白结合的互作蛋白（猎物蛋白），最终通过检测共沉淀的蛋白复合物，验证或筛选蛋白间的相互作用。采用温和的非变性裂解液（如含 NP-40、Triton X-100）处理细胞或组织，在不破坏蛋白间天然相互作用的前提下，提取总蛋白；向蛋白裂解液中加入针对诱饵蛋白的 IP 级特异性抗体，4℃孵育使抗体与诱饵蛋白充分结合，形成 “抗体 - 诱饵蛋白” 复合物；加入 Protein A/G 偶联的磁珠或琼脂糖珠，该磁珠可特异性结合抗体的 Fc 段，从而将 “抗体 - 诱饵蛋白 - 互作蛋白” 复合物共沉淀到磁珠上；通过多次洗涤去除未结合的杂蛋白，再用洗脱液将复合物从磁珠上洗脱，最后通过 Western Blot 检测已知互作蛋白，或通过质谱鉴定未知互作蛋白。
文献案例
《Cell》发表题为“Interfamily co-transfer of sensor and helper NLRs extends immune receptor functionality between angiosperms”的研究论文。研究人员前期发现，水稻缺乏对细菌性条斑病的有效抗病基因，而辣椒等茄科作物则拥有识别该病原的NLR免疫受体。但单独转移辣椒的受体（如Bs2）到水稻中无法奏效，这是因为免疫信号在远缘作物中无法被解码。基于“感受型-辅助型”NLR受体协同作用的机制，团队提出了一个创新猜想：必须将负责识别病原的“感受型NLR”和负责传递信号的“辅助型NLR”配对转移，才能重构完整的免疫通路。为验证这一猜想，研究人员将辣椒的感受型受体Bs2与烟草的辅助型受体NRC共同导入水稻。要证实这一跨物种重构的免疫通路在水稻细胞内成功组装，必须提供Bs2与NRC受体蛋白之间存在相互作用的直接证据。Co-IP技术在此起到了核心验证作用。研究人员在转基因水稻中共表达带不同标签的Bs2与NRC蛋白，通过免疫共沉淀实验直接证明，两者能在水稻细胞内形成稳定的蛋白质复合物。这为跨物种免疫通路的成功组装提供了关键的分子互作证据。最终，这对受体组合成功激活了水稻的免疫反应，使其获得显著抗病性且不影响农艺性状。
送样标准
＞1×10⁷个/份，PBS 洗涤后离心收集，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需注明细胞系名称及处理条件
＞0.5g/份，新鲜组织用 PBS 洗净血迹，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需明确组织部位
＞1g/份，液氮速冻后 - 80℃保存，干冰运输；需提前去除细胞壁干扰（如研磨后过滤）
＞5×10⁶个细胞或 0.3g 组织，需提供标签信息（如 FLAG、GFP）及过表达验证报告，-80℃保存，干冰运输
交付内容
Co-IP 原始实验数据
Input 组、IgG 对照组、IP 实验组的 WB 原始图谱，条带灰度值定量分析结果；
互作验证报告
明确蛋白间是否存在相互作用的结论，结合对照组结果排除假阳性，提供条带对比分析；
技术支持文档
提供实验优化建议（如裂解液配方调整、抗体浓度优化）、常见问题排查指南，若为质谱鉴定则提供蛋白鉴定列表及生信分析报告。
常见问题
①磁珠非特异性结合，可在孵育前用总蛋白预孵育磁珠 10min，去除非特异性结合位点；②洗涤不充分，增加洗涤次数（3-4 次）或延长洗涤时间，可在漂洗缓冲液中适当提高盐浓度；③抗体浓度过高，降低抗体使用量，避免抗体过剩导致非特异性结合；④选择与实验组抗体同源同型的 Normal IgG 作为对照，确保对照的有效性。
①磁珠与抗体结合效率低，可更换 Protein A/G 磁珠，或使用交联剂将抗体与磁珠共价结合；②洗脱条件温和，可采用变性洗脱（如 1×SDS-PAGE 上样缓冲液）提高洗脱效率，或增加洗脱液体积后浓缩；③总蛋白量不足，适当增加初始样本量（细胞或组织），提高总蛋白提取量。
①Co-IP 无法直接区分直接与间接互作，需结合体外 Pull-down 实验（使用纯化的重组蛋白）验证直接结合；②通过分子克隆构建诱饵蛋白的截短体，明确互作结构域，排除通过中间蛋白介导的间接互作；③利用双分子荧光互补（BiFC）等细胞内原位互作技术，进一步验证蛋白间的直接相互作用。
